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单-多光子-激光扫描显微镜及荧光寿命成像集成系统
发布日期:2017-03-24 浏览次数: 字号:[ ]

-多光子-激光扫描显微镜及荧光寿命成像集成系统(Confocal-Multiphoton Laser Scanning Microscopy and Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy, Confocal-MP-FLIM)

型号:TCS SP8

购买日期:2013-04-23

主要规格及技术指标

1. 多光子激光器,MaiTaiDeepZ,激发波长690-1040nm

2. 单光子激光器:激发波长(nm):405、458、476、488、496、514、561、633

3. 检测通道数:该仪器设置有三个荧光通道,一个透射通道。

4. 检测波长范围:400-800nm

5. 倒置荧光显微镜:以金属卤素灯为光源,配套有不同倍率的APO油镜(APO 100×/1.4、APO 63×/1.4、APO 40×/1.32、APO 25×/0.75,APO 16×0.5)、干镜(APO 10×/0.4,APO 20×/0.7)和水镜(APO 25×/0.95)

6. 最高扫描分辨率8096×8096

7. 扫描频率:7幅/秒(另带固定物台,特别适合小动物在体脑成像)

8. CO2温控微型装置

9. 双通道FLIM荧光寿命检测装置

主要功能及特色

TCS SP8 MP FLIM 是单光子Confocal、倒置双光子扫描显微镜和荧光寿命成像(FLIM)单分子检测的集成系统,为目前国内同类产品最高端配置,于2012年底安装。可在2D或3D水平进行高分辨、高灵敏度、实时、活细胞或固定细胞和组织内多重荧光标记的定位(共定位),定量和定性检测,并可同时实现分子或单分子功能的检测。

 

单光子Confocal常规检测项目

1. 采集单荧光标记和多重荧光标记样品的二维荧光图像(xy或xz)和透射光的DIC图像.

2. 采集三维荧光图像(xyz或xzy),可清晰显示样品内的微细结构和各种被标记分子荧光信号的相对位置,从而给出精细三维定位或共定位分布的荧光图像.

3. 采用动态跟踪或静态方法检测活细胞的生理变化及损伤情况,如:细胞融合,细胞凋亡等.

4. 实时跟踪荧光信号随着时间的变化(xt,xyt,xyzt),检测细胞内Ca2+、H+、自由基、线粒体膜电位的动态变化.

5. 检测药物进入细胞内的动态过程及分布.

6. 检测样品荧光光谱(xy-λ),可对光谱重叠的多重荧光信号进行光谱拆分.

7. 可进行光活化的检测.

8. 荧光漂白恢复FRAP检测:蛋白分子的运动、转位;细胞间通讯、膜流动性等.

9. 荧光能量共振转移(FRET)的检测。如检测:两种蛋白质之间的相互作用、蛋白质分子构型的改变等

10. 大视野拼图成像(二维或三维成像),如:全脑组织切片拼图成像。

11. 囊泡、细胞等实时轨迹追踪及轨迹分析

12. 发射光谱扫描

13. 光谱拆分

特色检测项目

一、 双光子在体2D/3D/4D(xyzt)成像

1)在体肾脏组织成像

2)在体免疫系统成像

3)在体颌下腺成像

4)在体皮肤组织成像

二、荧光寿命成像FLIM、FLIM FRET检测

1)溶液中荧光分子的荧光寿命

2)活细胞或固定细胞中荧光分子的荧光寿命

3)FLIM FRET检测活细胞或固定细胞中两个分子之间相互作用,

如:蛋白质与蛋白质、受体与配体、

蛋白质与DNA、蛋白质与RNA

三、观测Transwell中分子、颗粒和细胞定位

图像处理与定量分析

1. 专业2D图像分析软件 Qwin

细胞或生物样品的几何形态参数的测量,对特异性组化标记、免疫组化标记的组织或细胞内的化学成份进行光密度测定,还可对荧光标记的生物样品进行荧光强度的测量和几何参数的测量。能测量几十种几何形态参数,如:面积、周长、最大径、最小径、圆周系数等

2. 专业3D图像分析软件Imaris

1)多色荧光标记三维重构和动画制作

2)多色荧光标记3D图像的处理

3)3D共聚焦图像的形态学定量和荧光强度定量分析,包括:细胞或亚细胞器等表面积、体积、粒径,被标记蛋白在3D空间的表达水平和分布

4)神经元树突分析与3D重构

5)实时2D/3D多色荧光分子的轨迹追踪分析

3. 专业3D图像分析软件Volocity

1)多色荧光标记三维重构和动画制作

2)多色荧光标记3D图像的处理

3)3D共聚焦图像的形态学定量和荧光强度定量分析,包括:细胞或亚细胞器等表面积、体积、粒径,被标记蛋白在3的空间的表达水平和分布

4)实时2D/3D多色荧光分子的轨迹追踪分析

大视野拼图成像(二维或三维成像),如:全脑组织切片拼图成像

平台简介

Confocal平台创建于1997年,近二十年来,Confocal平台历经了5代Confocal的发展,从最早的滤片型Confocal,发射光谱型Confocal,发展到双光子+FCS单分子检测Confocal(Leica TCS SP5 MP FCS)和双光子荧光寿命成像Confocal(Leica TCS SP8 MP FLIM)和超高分辨率共聚焦显微镜Leica TCS SP8 STED 3X。

测试服务:该平台面向全校和社会开放,每台设备年平均机时达2000多小时。近几年来,利用Confocal平台平均每年发表的文章数十篇,最高影响因子23。在2013和2015年北大实验技术成果奖评选中该平台获得了二等和三等奖共三项。

教学:平台承担与共聚焦和图像分析相关的多门研究生课程和本科生课程。

二十年来,我们为医学部研究生和本科实验班开设《激光扫描显微镜和流式细胞技术》课程,并为研究生开设《Confocal实验操作技能》和《图像分析实验操作技能》一对一小班课程,及《高级医学技术》课程,每年均有来自全国各地的人员来我平台进修。

科研:承担国家自然科学基金、科技部重大仪器研发项目、北京大学及多项横向合作科研项目。

人员:Confocal平台技术力量雄厚,6名工作人员,其中正高职称2人,副高职称2人,博士学位4人。

所属实验室: 生物成像与分析实验室

联系方式:82802389

 




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